As Bactérias No Ambiente: Classificação das bactérias (método de Gram + Morfologia)

Criado pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (1853-1938) em 1884, o método de Gram é uma técnica de coloração diferencial que permite diferenciar, por meio de miscroscopia óptica, os dois principais grupos de bactérias.

Gram obteve, com a coloração realizada, uma melhor visualização das bactérias em amostras de material infectado. Entretanto, observou que nem todas as bactérias coravam com este método, o que o levou a sugerir a possibilidade de ser usado um contrastante. O cientista morreu sem que reconhecessem a importância de seu método. Atualmente, esta técnica é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, sendo utilizada como técnica de rotina em laboratórios de bacteriologia.
O método de Gram consiste em expor as bactérias à seguinte sequência:
Corante primário: violeta de cristal – Cora o citoplasma de púrpura, independente do tipo de bactéria.
Mordente: solução de iodo – Aumenta a afinidade entre o violeta de cristal e a bactéria e forma com o corante um complexo insolúvel dentro da bactéria.
Agente descolorante: álcool, acetona ou ambos – Dissolvem lipídios.
Contrastante: safranina ou fucsina básica – Cora o citoplasma de vermelho.
Se ao fim desta sequência, a bactéria adquirir coloração púrpura, ela é classificada como Gram positiva. Caso adquira coloração vermelha, sua classificação é de Gram negativa.
Estudos de microscopia eletrônica e análises bioquímicas permitiram concluir que a parede celular bacteriana é a estrutura responsável pelo diferente comportamento das bactérias ao método de Gram.
As bactérias Gram positivas apresentam uma parede espessa, homogênea, geralmente não estratificada e predominantemente constituída por peptidoglicano. Esta camada espessa de peptidoglicano retém, no interior da bactéria, o complexo insolúvel que se forma pela ação do mordente. Logo, estas bactérias não são descoradas, permanecendo com a coloração conferida pelo corante primário (púrpura).

Parede celular de uma bactéria Gram positiva

As bactérias Gram negativas apresentam uma parede estratificada constituída por uma membrana externa e por uma camada mais interna que contém peptidoglicano; esta camada é mais fina do que a camada encontrada nas bactérias Gram positivas.

Parede celular de uma bactéria Gram negativa

Nas bactérias Gram negativas, então, o complexo insolúvel formado pela ação do mordente é removido (a membrana externa é parcial ou totalmente solubilizada pelo agente descolorante e a fina camada de peptidoglicano não retém corante o suficiente para dar a coloração púrpura) e as bactérias ficam descoradas, corando de vermelho pela ação do contrastante.
Vale comentar que embora uma bactéria Gram negativa nunca possa corar positivamente pelo Gram, uma bactéria estruturalmente Gram-positiva pode corar negativamente se a sua parede de peptidoglicano for destruída ou danificada (exemplo: envelhecimento celular ou ação de lisozimas).
Além de serem classificadas em Gram positivas ou Gram negativas, as bactérias também são organizadas observando-se seu formato. Veja alguns tipos de bactérias:
COCOS – bactérias de formato arredondado